Ukrainian Afrikaans Albanian Arabic Armenian Azerbaijani Basque Belarusian Bosnian Bulgarian Catalan Chinese (Simplified) Chinese (Traditional) Croatian Czech Danish Dutch English Estonian Filipino Finnish French Galician Georgian German Greek Haitian Creole Hebrew Hindi Hungarian Icelandic Indonesian Irish Italian Japanese Kannada Korean Latvian Lithuanian Macedonian Malay Maltese Norwegian Persian Polish Portuguese Romanian Russian Serbian Slovak Slovenian Spanish Swahili Swedish Thai Turkish Urdu Vietnamese Welsh Yiddish

Тел.: +38 044 24576 08 (приймальня)

Тел.: +38 044 24576 00 (бухгалтерія)

Факс: +38 044 24576 08

E-mail: Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

Зміна №1   ДСТУ 8397: 2015

 

Молоко і молочні продукти. Методи якісного визначання антибіотиків, сульфаніламідів та інших інгібіторів

 

1 РОЗРОБЛЕНО:

Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів Державної служби України з питань безпечності харчових продуктів та захисту споживачів

 nmb

2 ПРИЙНЯТО ТА НАДАНО ЧИННОСТІ: _

 

Наказ ДП «УкрНДНЦ»_ _від____________________№__________

 

 

Розділ 1 Сфера застосування викласти у новій редакції

«1 Сфера застосування

  1. Цей стандарт установлює методи якісного визначання антибіотків, сульфаніламідних та інших інгібіторів у молоці та молочних продуктах мікробіологічними, ензиматичними, імуноензимними та хроматографічними методами із застосуванням специфічних тест-систем
  2. Цей стандарт поширюється на сире коров’яче молоко, молочну сировину та молочні продукти (пастеризоване, стерилізоване питне молоко, згущені молочні консерви, сухе знежирене та незбиране молоко)

 

Примітка. Комерційні тест-системи: Polutest M, Polutest MS, Polutest MSS, Delvotest P, Delvotest SP, Copan Test, брильянтовий чорний редукційний тест (БРТ), Charm CowSide ІІ; Пензим, БетаCтар, BetaStar Соmbo та Charm ROSA MRL; «Twinsensor» KIT034 та «4SENSOR» KIT 060»

 

Розділ 2 Нормативні посилання

Вилучити з переліку посилань наступні документи:

ГОСТ 12.1.004-91 ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования (ССБП. Пожежна безпека. Загальні вимоги)

ГОСТ 12.1.008-99 ССБТ. Биологическая безопасность. Общие требования (ССБП. Біологічна безпека. Загальні вимоги)

ГОСТ 12.4.131-83 Халаты женские. Технические условия (Халати жіночі. Технічні умови)

ГОСТ 12.4.132-83 Халаты мужские. Технические условия (Халати чоловічі. Технічні умови)

ГОСТ 4220–75 Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия (Реактиви. Калій двохромовокислий. Технічні умови)

Долучити посилання на такі документи

ДСТУ 2212:2003 Молочна промисловість. Виробництво молока та кисломолочних продуктів. Терміни та визначення понять

ДСТУ 2295-93 (IEC 60335-2-24:1984, ISO 5155;1983? ISO 7371;1985) Прилади холодильні електричні побутові. Загальні технічні умови

ДСТУ 7748:2015 Безпека праці. Біологічна безпека. Загальні вимоги

ДСТУ ISO 3696: 2003 Вода для застосування в лабораторіях. Вимоги та методи перевіряння

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основне параметры и размеры (Посуд і обладнання лабораторні скляні. Типи, основні параметри і розміри)

НАПБ А. 01. 001–2004 Правила пожежної безпеки в Україні

 

Розділ 3 Терміни та визначення понять

Перший абзац викласти у такій редакції:

« У цьому стандарті вжито терміни згідно з ДСТУ 2212. Нижче подано терміни, додатково вжиті у цьому стандарті, та визначення позначених ними понять: »

 

Розділ 4 Суть методів випробування

Додати пункт 4.5

«4.5 Хроматографічний метод із застосуванням тест-наборів «Twinsensor» KIT034 та «4SENSOR» KIT 060

Суть методу полягає в утворенні комплексу антибіотиків беталактамного типу, тетрациклінової групи, лівоміцетину (хлорамфеніколу) та стрептоміцину із специфічними білковими рецепторами й моноклональними антитілами, міченими колоїдним золотом із наступною візуалізацією вільних мічених рецепторів й антитіл шляхом хроматографії на індикаторних смужках хроматографічного паперу, що містять відповідні реакційні та контрольні лінії фіксування. Випробування дійсне якщо контрольну лінію видно після двох інкубацій».

 

Розділ 5 Прилади, обладнання та реактиви

У пункті 5.16 посилання на ГОСТ 6709 замінити посиланням на ДСТУ ISO 3696.

Долучити пункти:

«5.30 Холодильник побутовий згідно з ДСТУ 2295.

5.31 Тест-системи «Twinsensor» KIT034» та «4SENSOR» KIT 060» які складаються з таких елементів:

- пробірки із специфічними білковими рецепторами й моноклональними антитілами, міченими колоїдним золотом

-тестові смужки

- одноканальний дозатор 200 µл

- піпетки разові для відбирання проб молока місткістю 0,2 см3

- позитивний стандартний зразок – є складовою частиною тест-системи і являє собою сухе молоко із вмістом 4 мкг/дм3 пеніциліну G, 200 мкг/дм3 стрептоміцину, 10 мкг/дм3 оксітетрацикліну та 0,3 мкг/дм3 хлорамфеніколу, забарвлене у світло-червоний колір.

- негативний позитивний зразок – є складовою частиною тест-системи і являє собою сухе молоко, що не містить антибіотиків і забарвлене у світло-зелений колір.

- інструкція з використання

- сертифікат відповідності

5.31.1 Доповнююче обладнання, необхідне для проведення тестування

-  інкубатор (Heatsensor, Ankar TF, Heatsensor DUO) – інкубація при температурі 40 С

- Оптичний обліковий пристрій Readsensor APP/APP039 згідно з чинним нормативним документом.

 

5.33 Термометр лабораторний з діапазоном вимірювання від 0 ºС до 100 ºС.

5.37 Лабораторні склянки згідно з ГОСТ 25336.

Розділ 6. Відбирання проб

Вилучити останній абзац: «Для довготривалого зберігання проб молока застосовують консерванти: калій двохромовокислий — згідно з ГОСТ 4220 або формалін — згідно з чинним нормативним документом»

Розділ 7 Готування реактивів та тест-систем

Долучити пункт

7.4 Підготовка проб сухого молока

У чистій сухій склянці зважують 10 г сухого молока, додають 90 см3 теплої (40 ºС) дистильованої води. Ретельно перемішують до повного розчинення. Пробу молока має бути однорідною, не мати згустків та осаду. Оптимальною температурою для проби молока вважають 4 ºС -20 ºС.

 

7.7 Підготовка та використання стандартних зразків

7.7.1 У скляну пробірку, що містить ліофілізований порошок із «позитивним» чи «негативним» стандартним зразком, вносять 1 см3 дистильованої води, підігрітої до 40 ºС. Витримують 1-1,5 хв та стряхують для запобігання утворення згустків. Для кращого розчинення порошку використовують вортекс. Якщо стандарт не був одразу проаналізований, він повинен зберігатися за температури 2-8С і використаний якомога швидше.

Розчини стандартних зразків використовують для контролю якості тест-систем. Контроль виконують для кожної партії тест-систем, що надійшли до лабораторії. Розчинені стандартні зразки використовують для проведення аналізу згідно з 8.10. Після проведення оцінювання результатів згідно з 9.5 за використання доброякісних тест-систем повинні бути отримані такі результати:

- за використання негативного стандартного зразка усі тестові лінії мають бути більш інтенсивного забарвлення, ніж контрольна;

- за використання позитивного стандартного зразка усі тестові лінії мають бути такої ж інтенсивності забарвлення як і контрольна, світліше ніж контрольна або забарвлення має бути відсутнім.

 

Розділ 8 Випробування

Долучити пунктами:

«8.10 Метод випробування з використанням тест-систем «Twinsensor» KIT034 та «4SENSOR» KIT 060

Під час проведення випробувань мають бути дотримані умови виконання температура повітря 10 ºС -30 ºС; атмосферний тиск – 84,0 -106,7 кПа; вологість повітря не вище ніж 80%; напруга у електромережі 220±10 В; частота пермінного струму 50±1 Гц.

8.10.1 Вибирають чисте і сухе місце для проведення випробувань, а також вимивають і висушують руки перед початком аналізу.

8.10.2 Підключити інкубатор і зачекати до тих пір, доки температура підніметься на рівень 40 ºС.

8.10.3 Перед проведенням аналізу необхідно дістати тест-систему із холодильника і, не відкриваючи туби, не менше ніж 15 хвилин, доки  температура реагентів досягне рівня температури оточуючого середовища

8.10.4 Відкривають одну пластикову тубу і дістають мікролунки, у кількості рівній кількості проб молока, які необхідно дослідити одночасно.

 

Примітка. Під час відкривання тубів потрібно дотримуватися рекомендацій та застережень виробника.

 

8.10.5 Мікролунки розміщають в інкубаторі з температурою 40 ºС.

8.10.6 Закріпляють наконечник на дозаторі і вносять по 200 мкл молока у кожну з мікролунок. Для кожної проби молока використовують новий наконечник.

8.10.7 Швидко змішують молоко та реактив, піпетуючи зразок за допомогою дозатора не менше ніж 5 разів, і, незволікаючи, вмикають кнопку «ЗАПУСК» на інкубаторі. Після цього починається зворотній відлік часу 3 хв для «Twinsensor» KIT034 та 5 хв. - «4SENSOR» KIT 060.

8.10.8 Протягом часу інкубації відкривають ту ж тубу, що і на початку, виймають стільки тест-смужок, скільки досліджується проб.

 

Примітка. Не можна використовувати мікролунки та тест-смужки із різних туб.

 

8.10.9 По завершенню часу першої інкубації, у кожну з мікролунок, розміщених в інкубаторі занурюють окрему тест-смужку.

 

Примітка. Під час роботи з інкубатором дотримуйтеся вказівок  інструкції щодо його експлуатації.

 

8.10.10 Вмикають таймер для другої  інкубації. Після цього починається зворотній відлік часу 3 хв для «Twinsensor» KIT034 та 5 хв. - «4SENSOR» KIT 060.

8.10.11 По завершенню часу першої інкубації, виймають тест-смужки з мікролунок та розміщують їх на білому аркуші паперу. Видаляють пористу підложку, що розташована у нижній частині тест-смужки безпосередньо після завершення останньої інкубації та інтерпретують результати якомога швидше.

8.10.12 Після завершення випробування переконуються, що туби герметично закриті і кладуть для подальшого зберігання у холодильник за температури       (2-8) ºС.

Розділ 9 Опрацювання результатів

Долучити пункти

«9.5 Візуальна інтерпретація результатів, отриманих із застосуванням «Twinsensor» KIT034,  «4SENSOR» KIT 060)

9.5.1 В першу чергу перевіряють наявність контрольної лінії (середня у тест-смужках «Twinsensor» KIT034, верхня - «4SENSOR» KIT 060). Якщо контрольна лінія відсутня, то результат вважають недостовірним.

9.5.2 За наявності контрольної лінії тестові лінії оцінюють порівнянням інтенсивності кольору тестової та контрольної ліній (рис. 1 та рис.2).

Якщо тестова лінія має більш інтенсивне забарвлення, ніж контрольна, результат вважають негативним, що означає, що проба молока не містить антибіотиків або містить на більш низькому рівні, ніж вказано у таблиці додатку К.

Якщо тестова лінія має забарвлення такої ж інтенсивності, як контрольна, або світліше - результат вважають позитивним, що означає, що проба молока містить антибіотики на рівні або вище, ніж вказано у таблиці додатку К.

 

 

 

 

Зона виявлення антибіотиків тетрациклінової групи

 

Контрольна зона

 

Зона визначення антибіотиків беталактамного типу

1 – негативний

2 – позитивний беталактами

3 – позитивний тетрациклінова група

4 - позитивний беталактами і тетрациклінова група

5 – результати недійсні

Рис. 1 Результати візуального аналізу тест-смужок «Twinsensor» KIT034

 

 

 

Контрольна зона

 

Зона виявлення антибіотиків тетрациклінової групи

лівоміцетину

стрептоміцина

антибіотиків беталактамного типу

 

1 – негативний

2 – позитивний тетрациклінова група

3 – позитивний лівоміцетин

4 - позитивний стрептоміцин

5 – позитивний беталактами

6 - результати недійсні

Рис. 2 Результати візуального аналізу тест-смужок «4SENSOR» KIT 060)

 

9.5.3 Після оцінювання однієї тестової лінії, повторюють те ж саме з іншими.

9.5.4 Якщо у лаборанта є  сумніви щодо отриманого результату, його вважають позитивним і підтверджують оцінювання шляхом виконання другого аналізу чи другої інтерпретації результатів протягом наступних 15 хв «Twinsensor» KIT034 та 5 хв «4SENSOR» KIT 060. Для спрощення інтерпретації, підтвердження результатів та зменшення людського фактору компанія Unisensor рекомендує використовувати обліковий пристрій Readsensor(дивитися інструкцію з використання пункт 9.6 )

9.5.5 За необхідності, тест-смужку висушують та архівують, з можливістю зберігання  до 12 місяців в холодильнику за температури 2-8С. Під час висушування інтенсивність кольорів ліній посилюється.

 

Примітка. Ширина чи товщина ліній не має значення.

 

9.5.6 Для більш достовірної інтерпретації візуального оцінювання рекомендують використання облікового пристрою Readsensor.

9.6 Оцінювання результату за допомогою облікового пристрою Readsensor.

Readsensor можна використовувати як самостійно так і з допомогою комп’ютера. Прилад має дві різні клавіатури. Внутрішня клавіатура (кругла) як зафіксована на верхній поверхні приладу і складається з 5 кнопок. Зовнішня цифрова клавіатура з’єднується  з приладом за допомогою одного чи декількох серійних портів.

9.6.1 Усі дії виконують згідно з інструкцією щодо експлуатації пристрою.

9.6.2 Вмикають пристрій натисканням тільки центральної кнопки «5. Пристрій виконує ряд внутрішніх калібрувань перш ніж перейти до подальших операцій. У цей час зовнішня клавіатура автоматично активується. Звертають увагу, що тип тесту, який обрано у головному меню, відображається на дисплеї. Коли вказівник знаходиться напроти «Sample ID», у правій частині дисплея можна ввести номер зразка за допомогою цифрової зовнішньої  клавіатури.

9.6.3 Відкривають видвижну лунку великим та вказівним пальцем правої руки.

9.6.4 Піднімають чорну кришку для тест-смужок.

9.6.5 Поміщають тест-смужку без фільтра у центральний проріз видимою верхньою стороною і вставляють частину, яка була у контакті з молоком всередину облікового пристрою. Переконуються , що тест-смужка добре прилягає 4 сторонами.

9.6.6 Закривають чорну кришку для тест-смужок.

9.6.7 Закривають видвижну лунку.

9.6.8 Використовуючи зовнішню цифрову клавіатуру, вводять номер зразка молока і натискають «Enter». Чекають результату декілька секунд. Результат автоматично відображається на дисплеї і , у випадку, якщо принтер підключений, результат автоматично друкується.

9.6.9 Для послідуючих вимірів діють згідно з 9.6.3.

9.6.10 Якщо оператор забув замінити тест-смужку, це означає, що видвижна лунка не відкривалася протягом 2-х вимірів і пристрій робить запит на заміну тест-смужки. Оператор має відкрити і повторно закрити видвижну лунку і дати можливість пристрою автоматично почати вимірювання.

Коли результат готовий, він відображається на дисплеї (рис. 3), а також автоматично друкується, у разі підключення принтера.

 

Рис. 3 Результат вимірювань на дисплеї облікового пристрою

 

Значення «#, #» показує відношення інтенсивності забарвлення тестової лінії до інтенсивності забарвлення контрольної лінії. Співвідношення «1» означає, що тестова і контрольна лінії мають однакову інтенсивність. У більшості випадків співвідношення «1» отримують, якщо концентрація антибіотиків у пробі приблизно рівна тій, що вказана в межах виявлення набору.

Значення «###» показує інтенсивність забарвлення тестової лінії.

Кнопку «NT» - «наступний тест» - легко активують, натискаючи кнопку «Enter» на зовнішній клавіатурі або кнопку «5» на внутрішній клавіатурі.

Кнопка «Р» - «Друк» - призначена для виведення на друк результатів, які відображені на дисплеї. Для активації цієї кнопки необхідно натиснути клавішу «2» та клавішу «5» на внутрішній клавіатурі або «Enter» на зовнішній клавіатурі.

9.7 Усі позитивні проби мають бути перевірені повторно. За повторного дослідження рекомендують проведення паралельного дослідження завідомо негативної проби, наприклад використати негативний стандартний зразок. У разі отримання позитивного результату дослідження у завідомо негативній пробі вважають тест-систему недоброякісною і повторюють дослідження із використанням іншої партії тест-системи.

Розділ 11 Вимоги щодо безпеки

Замінити:

посилання на ГОСТ 12.1.008 посиланням на ДСТУ 7748;

посилання на ГОСТ 12.1.004 на НАПБ А. 01. 001.

 

Додаток К

Межі виявлення антибіотиків з використанням тест-систем

«Twinsensor» KIT034 та «4SENSOR» KIT 060

Антибіотик

«Twinsensor» KIT034, мкг/кг

«4SENSOR» KIT 060, мкг/кг

Пеніцилін-G

2-3

2-3

Ампіцилін

3-4

3-4

Амоксіцилін

3-4

3-4

Клоксацилін

6-8

6-8

Оксацилін

12-18

12-18

Нафцилін

30-50

30-40

Диклоксацилін

6-8

6-8

Цефацетрил

30-40

30-40

Цефапірин

6-8

6-8

Цефалоніум

3-5

3-5

Цефазолін

18-22

18-22

Цефоперазон

3-4

3-4

Цефкіном

20-30

30-35

Цефтіофур

10-15

10-15

Цефалексин

>750

1000-1200

Хлортетрациклін

5-7

5-7

Доксициклін

2-3

2-3

Окситетрациклін

7-9

7-9

Тетрациклін

8-10

8-10

Лівоміцетин (хлорамфенікол)

-

0,3

Стрептоміцин

-

150-200

Дигідрострептоміцин

-

150-200

 

На верх